ABSTRACT Apis mellifera bees are affected by viruses, bacteria, parasites, pesticides, fungus, or environmental modifications affecting their intestinal microbiota, which cause negative impacts on the immune system and behavior. One of the pathogen that affects the gut is Ascosphaera apis fungi, whose spores enter inside the larvae, colonize and mummified. An alternative to this situation is the supply of probiotic bacteria, which strengthen the intestinal microbiota and contribute to the defense against this fungi; however, the pollen bread, one of the products of the hive (mixture of honey, pollen, nectar, salivary substances), which generate the habitat for obtaining these bacteria. The objective of this work was to isolate, select and genetically identify strains of Lactobacillus spp., probiotic potential of conserved pollen, for a future application in hives that favor the health of bees .The samples were collected from apiaries in the Province of Jujuy were selected bacteria of the genus Lactobacillus spp. to which tests were carried out to evaluate their probiotic capacity: growth at temperatures (30, 37 and 40 °C), tolerance to pH (3, 4 and 7), bile (0.3 and 1%) hemolysis, sensitivity to antibiotics and antagonists against A. apis LSAPJuy (MH633693). The selected strains were sequenced with 16S and deposited in GenBank. As a resultt 17 strains were obtained that grew at the temperatures subjected, however in the acidity and bile test, 10 strains grew, with y -hemolysis and sensitivity to antibiotics. Of the 10 strains, 6 were able to inhibit the fungus, identified as: Lactobacillus kunkeei LSAJ (MF435935), Lactobacillus melliventris LSAM (MF435936), Lactobacillus helsingborgensis LSAI (MF435934), with two repetitions each. These bacteria were selected for a future application in hives.

RESUMEN Las abejas Apis mellifera se encuentran afectadas por virus, bacterias, parásitos, plaguicidas, hongos o modificaciones en el am biente que influyen en su microbiota intestinal y causan impactos negativos en su sistema inmunológico y en su comportamiento. Uno de los patógenos que inciden en el intestino es el hongo Ascophaera apis, cuyas esporas ingresan al interior de las larvas, las colonizan y momifican. Una alternativa a esta situación es el suministro de bacterias probióticas, que refuerzan la microbiota intestinal y contribuyen a la defensa contra este hongo. Sin embargo, el pan de polen es uno de los productos de las colmenas (mezcla de miel, polen, néctar, sustancias salivare), que generan el hábitat para la obtención de estas bacterias. El objetivo de este trabajo fue aislar, seleccionar e identificar genéticamente cepas de Lactobacillus spp., con potencial probiótico del polen conservado, para una futura aplicación en colmenas que favorezcan la salud de las abejas. Las muestras fueron recolectadas de apiarios de la Provincia de Jujuy. Se seleccionaron bacterias del género Lactobacillus spp. a las cuales se les realizaron pruebas para evaluar su capacidad probiótica: crecimiento a temperaturas (30, 37 y 40 °C), tolerancia a pH (3, 4 y 7), bilis (0,3 y 1%,), hemolisis, sensi bilidad a antibióticos y antagonismo frente a A. apis LSAPJuy (MH633693). Las cepas seleccionadas fueron secuenciadas con 16S y depositadas en GenBank. Se obtuvieron 17 cepas que crecieron a las temperaturas sometidas. Sin embargo, en el ensayo de acidez y bilis crecieron 10 cepas, con y-hemólisis y sensibilidad a los antibióticos. De las 10 cepas, 6 lograron inhibir el hongo: Lactobacillus kunkeei LSAJ (MF435935), Lactobacillus melliventris LSAM (MF435936), Lactobacillus helsingborgensis LSAI (MF435934), con dos repeticiones cada una. Se seleccionaron estas bacterias para una futura aplicación en colmenas.

ABSTRACT This research is aimed to evaluate the effect of copper on biomass growth, laccase activity and isoenzymes composition of Pleurotus sajor-caju, and its ability to grow on effluents of the citrus industry. The inhibitory effect of copper on growth was evidenced especially after 14 days of culture in the presence of the highest concentration of copper (1 mM) reducing almost three times its growth. The highest enzyme activity was reached at the 10th day of treatment, with ~ 53 U/L for the medium without copper and ~ 121 and ~ 68 U/L for medium supplemented with 0.5 and 1mM, respectively. Laccases in cell-free extracts obtained from culture added with copper showed to be more stable for more time at temperature changes. The optimum temperature for laccase activity increased from 50 to 60 ºC by effect of copper while the optimal pH was 5 in all experiments. In gels, it was possible to observe two isoenzymes of 65 and 35 kDa whose expression varied according to incubation time. Moreover, the isoenzyme of low molecular weight was induced by the presence of effluent in solid medium. P. sajor-caju had the ability to grow on effluents from the citrus industry, showing tolerance and potential for waste treatment, constituting a possible alternative to biodegrade and reduce the contaminating impact of effluents.

RESUMEN Esta investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto del cobre en el crecimiento de la biomasa, la actividad de lacasas y la composición de isoenzimas de Pleurotus sajor-caju, así como su capacidad para crecer en los efluentes de la industria citrícola. El efecto inhibidor del cobre sobre el crecimiento se evidenció especialmente después de 14 días de cultivo en presencia de la mayor concentración de cobre (1 mM), reduciendo casi tres veces el crecimiento. La actividad enzimática más alta se alcanzó a los 10 días para todos los tratamientos, con ~ 53 U/L para el medio sin cobre y ~ 121 U/L y ~ 68 U/L para los medios suplementados con 0.5 y 1 mM, respectivamente. Las lacasas en los extractos libres de células obtenidas del cultivo agregado con cobre mostraron ser más estables por más tiempo a los cambios de temperatura. La temperatura óptima para la actividad de lacasas aumentó de 50 a 60 ºC por efecto del cobre, mientras que el pH óptimo fue de 5 en todos los experimentos. En los geles fue posible observar dos isoenzimas de 65 y 35 kDa cuya expresión varió según el tiempo de incubación. Además, la isoenzima de bajo peso molecular fue inducida por la presencia de efluente en medio sólido. P. sajor-caju fue capaz de crecer en el efluente de la industria citrícola, demostrando tolerancia y un potencial para el tratamiento de residuos, constituyendo una posible alternativa para biodegradar y reducir el impacto contaminante de los efluentes.

Abstract Oxidative enzymes secreted by white rot fungi can be applied in several technological processes within the paper industry, biofuel production and bioremediation. The discovery of native strains from the biodiverse Misiones (Argentina) forest can provide useful enzymes for biotechnological purposes. In this work, we evaluated the laccase and manganese peroxidase secretion abilities of four newly discovered strains of Trametes sp. that are native to Misiones. In addition, the copper response and optimal pH and temperature for laccase activity in culture supernatants were determined.The selected strains produced variable amounts of laccase and MnP; when Cu2+ was added, both enzymes were significantly increased. Zymograms showed that two isoenzymes were increased in all strains in the presence of Cu2+. Strain B showed the greatest response to Cu2+ addition, whereas strain A was more stable at the optimal temperature and pH. Strain A showed interesting potential for future biotechnological approaches due to the superior thermo-stability of its secreted enzymes.